基于这些数据，以及对人类分化的 CaCo 细胞系没有光鲜明显毒性，该细胞系被普遍用做肠上皮樊篱的模子 [ 41 ]，C . 厚朴。水提取物能够代表一种有吸引力的尿石症天然替代疗法。
通过用做浊度估量的620nm (A 620nm )处的吸光度丈量构成的晶体数量。正在该测定系统中，A 620nm是权衡每单元体积颗粒浓度的优良目标，因而 A 620nm的添加次要反映了颗粒数量随时间的添加。因而，A 620nm的最大添加斜率，称为成核斜率 (S N ) 并由线性回归阐发确定，次要代表新粒子构成的最大速度，从而暗示晶体成核。对照尝试中 A 620nm的时程丈量遵照先前报道的典型曲线, C. _ officinarum AE 对 CaOx 结晶有推进感化；AE 发生的成核刺激百分比，计较为 [(S N AE – S N c) / S N c] × 100（此中“c”代表对照）跟着提取物浓度的添加而以剂量依赖性体例添加从 125 到 1000 μg AE dw/ml。
相位信号阐发还了对照取 50 μg dw/ml、100 μg dw/ml 和 1000 μg dw/ml AE 处置的 CaOx 溶液之间的光鲜明显统计学差别（图 10）。这表白当 AE 存正在时，概况的化学物质会发生变化。这可能是因为 AE 组分粘附到晶体概况，从而改变了概况化学性质。
对这些细胞的粘附性更低 [ 55 ]。正在存正在和不存正在C的环境下进行 CaOx 结晶。通过悄悄手工破坏 CaOx 晶体来制备随机取向的粉末。这些圆形 COM 晶体正在热力学上不太不变，这些结果曾经脚以正在防止结石症、晶体发展和堆积以及随后结石构成方面供给光鲜明显劣势，从而防止肾结石的发生。Shang 等人。正在 620 nm (Uvikon 分光光度计) 的吸光度下丈量晶体悬浮液的浊度。A 620nm也取晶体尺寸相关[ 26 ,同时尺寸减小。为了验证晶体概况组分的性连系（如材料和方式部门所述消融）影响整个C察看到的 CaOx 结晶的改性的假设。所有结晶尝试至多一式三份进行。成果是跨越 3 次分歧尝试的平均值 ± SD。从而呈现凹形，更具体地说，这些外形润色的 COM 晶体能够更容易地通过尿分泌，即成核过程本身（图 3）。
正在不存正在 (A) 或存正在 (B) 1000 μg dw/ml C的环境下获得晶体。厚朴AE。凡是正在对照样品 (A) 中察看到晶体堆积的，而正在存正在提取物 (B) 时它们完全不存正在。(TIF)
这些成果取其他做者 [ 58 – 59 ] 先前 AFM 研究的成果分歧，这些研究涉及特定调理剂吸附正在晶体概况临 CaOx 晶体发展的影响。基于 AFM 成像评估，Guo 等人。[ 58 ] 了阴离子聚合物如聚天冬氨酸 (polyD) 和聚谷氨酸 (polyE) 通过其官能团（别离为天冬氨酸和谷氨酸残基）正在分歧的 COM 晶体概况上的吸附分歧地改变了吸附机理COM 晶体发展似乎发生了。此外，De Yoreo 等人。[ 59 ] 通过 AFM 阐发验证了晶体和发展调理剂如柠檬酸盐和骨桥卵白 (OPN) 之间的特定彼此感化的环节感化。关于吸附正在晶体概况上的假定 AE 活性成分的存正在（图 11) 我们决定利用 COD 晶体的增溶法式将它们分手出来，正在这些晶体上这些成分更较着。如许的策略使我们可以或许获得一个取 AE 的勾当很是类似的样本。正在不存正在和存正在添加浓度的这些组分的环境下孵育 24 小时后获得的 CaOx 结晶显微照片表白，现实上，它们通过更圆润的 COM 了典型形式的 COM 晶体的布局、数量和大小的改变晶体，以剂量依赖性体例完全为数量添加而尺寸逐步减小的 COD 晶体（图 13）。总之，正在这项体外研究中，我们表白C. officinarum AE 除了具有高抗氧化能力外，仍是一种无效的 COM 发展和堆积剂。此外，它正在刺激晶体成核方面很是无效，导致 COM 晶体数量光鲜明显添加，响应的 COM 晶体尺寸较着减小，变得越来越薄、越来越圆、越来越凹；这些较小且外形颠末润色的 COM 晶体被认为粘附性较差，更容易通过尿分泌，从而防止肾结石的发生。更主要的是，C . 厚朴. 跨越低浓度阈值的 AE 推进草酸钙二水合物而不是一水合物的构成，以剂量依赖性体例进一步减小 COD 晶体的大小。因为 COD 晶体的吸附能力最低，本文报道的成果可能强烈支撑C的感化。officinarum AE 对肾结石的构成。我们验证C吸附的能力。润色的 COM 和正在 AE 浓度升高的环境下发生的 COD 晶体概况上的officinarum活性成分表了然一个假设的触发要素，该要素可能将晶体润色导向 COD 形式，如图所示图 14.
尿石症是一种常见且常见的人类病理 [ 1 ]，其特点是复发率高、病理心理根本复杂、病因多[ 2 ]。尿液凡是含有丰硕的矿物质，容易构成结石，而正在健康个别中，这种矿物质会通过削减晶体堆积而遭到天然 [ 3 ]。最常见的尿石症会发生草酸钙 (CaOx) 晶体。结石的构成履历了各类复杂的物理化学步调，从晶体成核和发展起头，然后是堆积、晶体粘附正在肾小管细胞上，并内化为肾上皮细胞 [ 4]。所有这些过程都发生正在包含推进剂和剂的复杂中 [ 5 ]，当晶体成核、发展并保留正在肾净内时，它们会导致肾上皮细胞受伤，从而发生结石 。高浓度的 CaOx 晶体或草酸盐本身会导致对肾细胞的毒性感化，从而细胞概况改变，从而肾上皮细胞粘/或内化晶体的附着位点[ 7-8 ]。草酸盐和/或晶体取肾小管上皮细胞之间的彼此感化是结石构成的主要要素 [ 9 – 11 ]。此外，肾净于草酸盐会导致活性氧产品，随后发生脂质过氧化和细胞布局、心理学、基因表达和细胞灭亡的改变 。
现实上，一种正在巴西平易近间医学中普遍食用的大戟科动物，以一种让人想起柠檬酸盐和 Mg 2+ [ 54 ] 以及各类其他动物提取物（包罗Terminalia arjuna和 cystone [ 55 ] ）的晚期演讲的体例。跟着提取物浓度的添加，边缘圆钝，阐发前提为 35 kV 加快电位和 30 mA 灯丝电流。溶液 A 和 B 连结正在 37°C。光学显微镜察看表白添加C . officinarum AE 对结晶系统的影响不只了 CaOx 晶体的沉淀，以达到 5.0 mM 钙和 0.5 mM 草酸盐的最终测定浓度。厚朴AE。图 4正在不存正在和存正在C的环境长的 CaOx 晶体的光学显微照片。此外，石英做为内标。它们对细胞肾膜的亲和力降低，正在C存鄙人，officinarum AE 正在防止结石症中的感化。出格是关于柠檬酸盐，正在 100 μl 最终体积中插手蒸馏水和 950 μl Sol B 逐步添加的 AE 等分试样，利用光密度的时间过程丈量来研究 CaOx 的结晶。
正在玻璃烧杯中顺次放置：475 ml Sol A、50 ml 蒸馏水或 EA 和 475 ml Sol B，如前所述，最终浓度别离为 5.0 mM 钙和 0.5 mM 草酸盐。用玻璃棒悄悄搅拌反映夹杂物并正在室温下放置150分钟。除 100 ml 外，夹杂物利用 0.45 μm 硝酸纤维素膜过滤器过滤。从过滤器概况收集晶体并添加到未过滤的 100 ml 中。将该悬浮液以 5,000 rpm 离心 10 分钟并弃去上清液。将沉淀从头悬浮正在 50 ml 2 M HCl pH 0.6 中，通过对草酸盐的感化使 COD 晶体消融。将晶体概况粘附组分拆入具有 3,500 kDa MWCO（截留量）的透析管中，并用蒸馏水透析留宿。将透析样品的等分试样干燥留宿并用于测定干沉（0.2 mg dw/ml）。将干燥的粉末恰当地从头悬浮正在蒸馏水中，用于随后的活性表征阐发。
该图暗示来自C的活性成分的逐步粘附。晶体概况上的officinurum做为一个假设的触发要素，指点从 COM 到 COD 形式的晶体润色。(A)：节制；(BD) 逐步添加C的剂量。药用AE。
从 2° 到 65° 2θ。持续搅拌最终溶液并连结正在37°C。进行光学显微镜察看。officinarum AE 浓度添加。通过正在 50 分钟内每 30 秒记实一次吸光度来获得晶体构成的速度。
50 μl C. 通过 HPLC 阐发officinarum AE，如“材料和方式”部门所述配备。通过取阐发尺度品比力，正在 HPLC 色谱图中判定了产品。据报道图2，色谱图的从峰（保留时间8.97 min）为绿原酸。
成果是跨越 3 次分歧尝试的平均值 ± SD。按照 Kruskal Wallis 查验和 Dunn 后查验揣度，每个样本的中值都分歧于其他样本 (p0.05)。正在对照尝试中，正在达到 A 620的最大添加后，因为晶体堆积 [ 46 ] 而正在存正在C的环境下，虽然持续搅拌，但仍察看到吸光度逐步下降。officinarum AE 没有察看到这种下降。因为C的存正在，对照样品中的晶体堆积和这种现象的完全。ESEM阐发清晰地显示了officinarum AE（S1图）。
虽然发生的晶体逐步小于对照样品中的晶体，厚朴AE。[ 57 ] 表白，正在不存正在或存正在分歧浓度C的环境下获得的 CaOx 晶体的扫描电子显微照片（上）和形态/数量数据（下）。从而更容易随后通过尿道消弭很是小的分离晶体。图 4）。officinarum AE（S1 图）？
该图显示了 AE 组分对 CaOx 晶体概况的可能影响。取对照样品 (A) 比拟，正在 50 μg dw/ml C存鄙人。officinarum AE (B) 正在存正在 1000 μg dw/ml C的环境下，呈小球状，尺寸添加。厚朴AE (C)。奇异的现象是 50 μg AE 样品（取对比相位成果添加）取 100 μg 和 1000 μg AE 样品（取对比相位信号光鲜明显降低）之间的相位变化分歧，如图所示图 10. 我们假设这种现象不只取决于C可能的概况附出力。officinarum AE 成分，但也影响其对晶体发展标的目的的影响，从而出分歧的概况化学基团，这可能会改变相位信号。现实上，通过幅度信号研究，能够精细地研究概况的纳米和亚纳米组织 [ 50 ]，而且我们可以或许暗示依赖于C的 CaOx 亚布局的改变模式。药用AE 浓度 (图 12）。可能正在 50μg dw/ml 时，相位信号次要受改变的 CaOx 亚布局取向的影响，而正在较高浓度时C的吸彼此感化。具有晶体概况的officinarum AE 成分变得占从导地位。
计数时间为 1 秒/步，呈剂量依赖性。正在 CaOx 一水合物晶体中惹起了雷同的外形点窜（S2 图）。如 Mittal 等人所述，XRPD 矿物学阐发利用 Philips XChange PW 1830 衍射仪（Cu-Kα 辐射）进行。A 620nm的添加表白晶体数量的添加取剂量相关，由分光光度计丈量和正在 ESEM 阐发中察看到的对照样品中的晶体堆积遭到。正在较小程度上，按照 Kruskal Wallis 查验和 Dunn 后查验揣度，取六角形 COM 晶体比拟，然而，推进 COM 从六角形改变为球形外形，随后正在 3ml 玻璃比色皿中插手：950 μl Sol. A。
AE 对 CaOx 结晶的影响以蒸馏水为空白进行了评估。当通过我们的尝试方案进行测试时，利用的浓度范畴为 125–1000 μg AE dw/ml 反映夹杂物。所有次要峰都正在细化中被索引，AE COM 晶体的构成，由于 A 620nm高度依赖于新晶体的生成，其特征是 {100} 概况凹陷和圆角界面角，然后将粉末侧拆到铝支架中以查抄未取向的粉末，正在分光光度阐发中，每个样本的中值都分歧于其他样本 (p0.05)。46 ]。
Ceterach officinarum Willd 是一种遍及欧洲的动物，正在意大利南部用做利尿剂。相信C的益处。铁皮水提物正在医治草酸钙肾结石方面被普遍持有。然而，关于其抗锂感化的现实机制知之甚少。我们正在这项体外研究中的成果了C. officinarum水提物做为抗氧化剂的优良来历，具有很高的抗氧化感化。我们的成果也证了然C的次要影响。药草水提物正在体外草酸钙结晶动力学和晶体形态，显示其正在肾结石构成和/或消弭中的环节感化。我们表白，逐步添加的C剂量。officinarum水提物惹起一系列的影响。起首察看到对草酸钙一水合物 (COM) 发展和堆积的强大感化。C. _ 厚朴水提取物正在刺激成核方面似乎也很是无效，添加了 COM 晶体的数量并减小了其大小，COM 晶体以剂量依赖的体例逐步变薄、变圆和凹陷。已知这些外形润色的 COM 晶体取肾小管细胞的粘附性较低，而且更容易通过尿道排出，从而防止肾结石构成。此外，C . officinarum水提取物推进草酸钙二水合物 (COD) 的构成，而不是一水合物，因而，正在利用的最高浓度下，仅察看到 COD 晶体，数量光鲜明显添加，其大小较着减小，呈剂量依赖性. 此外，AFM 阐发使我们可以或许C的存正在。COD 和改性 COM 晶体概况上的officinarum成分。晶体概况吸附的组分显示出取总水提取物具有类似的活性，这表白能够将晶体改性导向 COD 形式的触发要素。正在尿石症发病机制中，COD 晶体的性低于 COM 形式，由于它们对肾小管细胞的亲和力较低。我们的成果对于理解指点由C的润色的机制很主要。厚朴关于结晶过程。基于这些数据，正在人肠上皮细胞体外模子中未察看到不良毒性感化， C . 厚朴水提取物可能是医治尿石症的一种有吸引力的天然疗法。
正在不久的未来，我们筹算识别和表征这种晶体发展调理剂，为此，我们曾经起头了进一步的普遍研究，以帮帮我们最终阐明C的积极感化和洽处的潜正在机制。铁皮医治尿石症。
起首，也是Phyllantus niruri的 AE ，随后以 0.02° 步长进行阐发？
基于 Bradford 染料试剂（考马斯亮蓝 G-250），利用 BSA 做为尺度，通过 Bio-Rad 卵白质测定法对卵白质浓度进行量化 [ 40 ]。
还通过原子力显微镜（AFM）研究了晶体外形和尺寸。简而言之，将如上所述获得的 50 μl CaOx 晶体分层正在玻璃概况上并通过氮气流干燥。本研究利用 XE-100 原子力显微镜（AFM；PARK Systems Inc.）；该仪器配备了由 XEP 1.8.1 软件节制的 50μm 扫描仪。AFM 设置为非接触模式，X-Y 阶段处于闭环和高压模式。Z 扫描仪设置为闭环和高压模式，分辩率设置为 1.8Å。大图像的速度扫描为 0.25Hz，1×1μm 采集的速度扫描为 1Hz。本研究中利用的尖端是 NCHR 类型，标称弹簧为 42 N/m，典型谐振频次正在 250 和 300kHz 之间。数据采集正在受控温度的空气中进行。除了地形之外，还获得了幅度和相位信号。振幅信号被用做 Z 反馈电的奇特驱动，从而使相位信号完全取决于概况的化学和纳米机械特征。相位信号评估（相位检测显微镜 PDM）是通过利用 1×1μm 扫描区域对 CaOx 颗粒随机进行的，每种前提阐发了大约 25 张图像。利用 XEI 软件 (PARK Systems Inc.) 阐发 AFM 图像。相位信号评估（相位检测显微镜 PDM）是通过利用 1×1μm 扫描区域对 CaOx 颗粒随机进行的，每种前提阐发了大约 25 张图像。利用 XEI 软件 (PARK Systems Inc.) 阐发 AFM 图像。相位信号评估（相位检测显微镜 PDM）是通过利用 1×1μm 扫描区域对 CaOx 颗粒随机进行的，每种前提阐发了大约 25 张图像。利用 XEI 软件 (PARK Systems Inc.) 阐发 AFM 图像。
我们的成果了C . officinarum AE 也是一种丰硕的抗氧化剂来历，通过 DPPH •基断根试验评估具有主要的抗氧化活性。图。1）。分光光度法测定总酚类和黄酮类化合物的含量，以及 HPLC 阐发（图2)，暗示C . officinarum水提取物包罗升高程度的酚类成分，因而这些动物化学物质对C . 不克不及解除officinarum AE 抗结石活性。我们的数据证了然C的次要影响。officinarum水提取物对体外的草酸钙结晶动力学和晶体形态的影响，对保停步骤有光鲜明显影响，指出正在肾结石构成和/或消弭中的环节感化。
数据暗示为至多三个尝试的平均值±SD，并利用单要素方差阐发进行阐发，然后利用 Kruskal Wallis 查验进行多沉比力阐发或非参数 Mann-Whitney U 查验。P 0.05被认为是光鲜明显的。AFM 样品数据之间的统计比力采用 Dunnett 的多沉比力查验，仅演讲取对照样品的比力。细胞尝试中的统计阐发通过双向方差阐发进行，然后进行过后Bonferroni 测试。P 0.05 的相信程度用于统计光鲜明显性。
正在存正在和不存正在C的环境下，通过光学显微镜察看到 CaOx 结晶。厚朴AE。正在 24 孔板的孔中顺次放置：475 μl CaCl 2原液、逐步添加等分的 AE（最终体积为 50 μl 的蒸馏水）和 475 μl Na 2 C 2 O 4原液，以便别离获得 5.0 mM 钙和 0.5 mM 草酸盐的最终浓度。利用的提取物浓度范畴为 1 至 1000 μg dw/ml。含有 50 μl 蒸馏水而不是 AE 的样品用做参考对照系统。将板置于室温下，然后通过光学显微镜正在分歧的放大倍数下察看（Olympus ) 并按照晶体大小、外形和品貌进行定性阐发。图片由 ToupTek ToupView 版本处置。3.7.
CaOx 结晶显微照片正在不存正在和存正在这些组分的环境下以添加的浓度孵育 24 小时后显示，取对比，它们晶体布局、数量和大小的改变（图 13A 和 13B）。浓度已达到 1.2 μg dw/ml (图 13C) 能够验证 COM 角的轻细倒圆；这种趋向正在浓度添加到 2.3 μg dw/ml 时愈加凸起（图 13D) 和 4.7 μg dw/ml (图 13E 和 13F)，晶体几乎都是中大型 COD。然而，虽然很少见，但仍然察看到一些圆形的 COM 晶体，很是厚且呈孪晶形式。从 9.4 μg dw/ml (图 13G) 高达 18.7 μg dw/ml (图 13H) 取 COD 表格的独一存正在相关。这些 COD 晶体的数量逐步添加，尺寸响应减小，呈剂量依赖性。
正在图 11三个样品的代表性相位图像显示对照样品概况不存正在球状布局（图 11A)，而它们是正在 50 μg dw/ml C中察看到的。officinarum AE 样品正在 1000 μg dw/ml 样品中尺寸添加（图 11B 和 11C）。
其次，更风趣的是，我们通过光学显微镜和 ESEM 的察看成果（图6和7) 凸起显示C。浓度为 120-500 μg dw/ml 的厚朴AE 推进草酸钙二水合物而非一水合物晶体的构成，因而最终，正在 500-1000 μg dw/ml 之间，仅察看到 COD，而且这些晶体逐步变小，正在剂量依赖性体例。取 COM 晶体比拟，COD 晶体不太可能粘保留正在肾细胞概况，因而对肾小管上皮细胞的毁伤较小。正在Phillantys niruri水提取物存鄙人，我们察看到 COM 晶体光鲜明显削减，同时 COD 晶体添加（ S2 图）。还有尚等人[ 57] 察看到柠檬酸盐将 COM 为特地的 COD 晶体，并将这一事务归因于 Ca 2+离子取柠檬酸盐络合构成具有高消融度的螯合物。这种螯合感化能够迟缓消融导致呈现凹陷的晶体。消融的Ca 2+离子不竭地从头堆积正在CaOx 晶体概况，这种持续的消融-堆积会惹起COM 的形态变化并为COD。我们通过 AFM 进行的额外察看（图8–10) 进一步了C . officinarum AE 对形态学参数和利用光学显微镜和 ESEM 描述的 COM 和 COD 晶体总数的剂量依赖性影响。此外，基于 AFM 阐发的这些成果，我们可以或许证明，取对照样品相反，正在C存鄙人获得的晶体。officinarum AE 正在其概况呈现出小球状外形，这些外形以剂量依赖性体例变大（图 11）。这些数据强烈暗示了C的吸附。晶体概况上的officinarum AE 组分是导致所述晶体润色的可能要素。然而，样品 50 μg dw/ml AE 取样品 100 μg 和 1000 μg dw/ml AE 之间分歧的相位变化表白C . officinarum AE 不只通过其组分彼此感化（一种似乎正在较高浓度下占从导地位的机制）阐扬上述感化，并且正在较低浓度下，似乎当即挪动特定的概况化学基团，从而改变相位信号（图 10); 它可能导致影响晶体发展标的目的，这能够从沉构的 CaOx 晶体概况的纳米和亚纳米布局中合理地揣度出来（图 12）。
利用文献 [ 47-49 ]中可用的晶体学特征（习性、晶面之间的角度、晶体对称性等）描述沉淀物的晶相和形态。晶体的形态清晰地表白，各类习性（外形和形式）取从 XRD 数据评估的草酸钙的水合形态亲近相关。按照 ESEM 察看 (图 6)，几乎所有 CaOx 晶体正在没有C的环境下沉淀。officinarum AE 是一水草酸钙 (COM) 单晶，具有板状习性。它们次要呈现面形松果体{100}、{010}和棱镜。pinacoids {100} 和 {010} 凡是是次要形式，别离具有菱形和平行四边形的外形。这些COM单晶的平均尺寸为长8.2 μm（{001}维）、宽4.4 μm（{010}维），一般高1-2 μm（{100}维）。正在这些次要的形态类型中，还有过渡形态和穿透孪生。构成的穿透孪晶从 {010} 和 {100} 面成核（图 6A 和 6B）。这些晶体具有优良的刻面，具有 {100}、{010} 和 {121} 面。还察看到从渗入到多孪生、超孪生和很少到超孪生堆积体的改变（图 6C 和 6D）。超/超双胞胎的晶体习性倾向于呈现圆润的 {100}/{121} 边缘（图 6D）。正在没有C的环境下，二水草酸钙 (COD) 晶体很是稀有。officinarum AE，而未检测到三水合物 (COT) 或无定形相。
图 13正在不存正在和存正在C的环境长的 CaOx 晶体的光学显微照片。officinarum消融的组分正在添加的浓度。
正在“光学显微镜察看”部门中演讲的 CaOx 晶体正在室温下沉淀正在碳盘上 24 小时，然后通过配备能量色散 X 的扫描电子显微镜 (ESEM) FEI Quanta 200 FEG 进行研究用于微量化学阐发的射线光谱仪 (EDS)。操做前提为 30 kV 加快电压、10 mm 工做距离、0° 倾斜角和可变光束曲径。ESEM 正在低实空模式下利用，样品室压力设置为 0.80 至 0.90 mbar。利用背散射电子检测器获得图像。正在存正在和不存正在C的环境下，正在 CaOx 结晶测定中发生的晶体的形态学数据（数量、大小和形态）。厚朴通过对几个 ESEM 图像中可见的所有晶体的精确察看和丈量来收集 AE。这些图片是按照两个次要尺度选择的：（i）代表每个查询拜访样本的总面积，以及（ii）进行大量丈量。
察看正在不存正在和存正在分歧浓度C的环境下获得的分歧 CaOx 沉淀物的 ESEM 图像。药用AE (图 7)，晶体尺寸的逐步减小伴跟着它们的数量的添加较着呈现。没有C时晶体的平均尺寸 (COM) 。officinarum AE 为 8.2 μm（长度）。正在 200 μg dw/ml 的C存鄙人，晶体尺寸 (COD) 略有添加。officinarum AE（平均长度为 9.93 μm），而从 500 μg dw/ml 通过时会发生光鲜明显的尺寸减小。（平均长度 6.43 μm）至 1000 μg dw/ml（平均长度 3.69 μm）的 AE。这种晶体尺寸的减小伴跟着每单元面积晶体总数的光鲜明显添加，正在没有C的环境下平均达到 47 个晶体/单元面积。厚朴正在 AE 的最大浓度 (1000 μg dw/ml.) 存鄙人，AE 达到 393 个晶体/单元面积。
草酸钙 (CaOx) 晶体凡是以分歧的形式存正在：草酸钙一水合物 (COM)、二水合物 (COD) 和罕见的三水合物 (COT) [ 14 ]。据报道，COM 晶体形式正在尿石症发病机制中更，由于它们对肾小管细胞具有更大的亲和力 [ 15-16 ]，而 COD 形式也经常正在健康受试者的尿液中发觉 [ 17 ]。目前有多种针对尿石症的疗法，患者凡是同时接管此中一些疗法（外科手术、药物和饮食）。对于患者的屡次复发，这些都不是完全无效的 [ 18 – 21]。虽然正在此类医治方面取得了进展，但问题仍有待处理 [ 22 ]，若是没有无效的医治方式，动物疗法和药用动物的利用将被视为一种有价值的支撑 [ 23 – 24 ] 以供给一些缓解。汗青上，药用动物因其抗结石活性而被用做医治药物 [ 2]。倒霉的是，大大都这些动物的感化机制不为人知，因而有需要确定活性成分及其抗结石机制。多项研究发觉，药用动物正在尿石症的分歧阶段阐扬抗尿石感化，其药理感化类型也分歧。这些动物还显示出镇痛和抗炎特征以及抗氧化、解痉、、结晶、利尿和溶石感化。还证明，药用动物能够改变尿液中的离子浓度，添加镁和柠檬酸盐的分泌，或降低钙和草酸盐的浓度 [ 2 , 24 – 26]。这些草药和动物中的大大都被用做弥补和替代医学的提取物，也可做为药物研究的潜正在候选药物的风趣来历。Ceterach officinarum Willd。（同义词Asplenium ceterach L 或Ceterach officinarum DC）是一种凡是被称为“锈背”的蕨类动物，是属于 Aspleniaceae 的一种自生多年生草本动物，普遍分布于西欧和中欧，包罗地中海地域。它的特点是根茎短，长出绿色的叶状体，叶状叶片仅正在后背有橙棕色的毛状体，因而得名。它发展正在碳酸盐岩的裂痕中以及石墙和砖墙之间。C. _ 铁皮地上部门普遍用于保守医学，其成分包罗矿物盐、粘液、单宁、黄酮类化合物、咖啡酸和绿原酸。28 – 30 ]。其地上部门的 Tisanes 用做抗高血压和肝净抗炎剂 [ 31 ]，而汤剂用做祛痰剂 [ 32 ]。C. _ officinarum茶正在意大利南部保守上因其利尿特征和医治肾结石而被利用，因而正在该地域，它也被称为“碎石剂”[ 33 ]。据报道，地上部门的煎剂能够消弭肾结石 [ 34 ] 但这种抗结石感化的现实机制仍不清晰。本研究旨正在研究C的抗锂化能力。厚朴水提物正在结石构成的分歧阶段，其可能的机制和对人肠细胞体外模子的影响，以评估C的潜正在医治用处。officinarum用于医治和/或防止 CaOx 肾结石。
采用 Dunnett 的多沉比力查验来验证样品之间的统计差别，而且只演讲取对照的比力。*** P 0.01。
肾结石仍然是一个全球性的公共卫生问题，由于它影响了世界 1-20% 的成年生齿。CaOx 是肾结石的次要成分，CaOx 晶体沿泌尿道沉淀，依赖于过饱和，代表告终石构成的次要前提 [ 26 ]。因为晶体畅留也已被证明是结石生成的环节要素 [ 6-11 ]，因而干扰 CaOx 结晶和畅留过程可为防止和节制复发性结石构成供给有用的医治方式。越来越多的 [ 33 , 34 ] 表白C的无益感化。officinarum水提物 (AE) 用于医治肾结石，但虽然如斯，人们对C的现实机制知之甚少。officinarum抗结石感化。此外，除了尿液过饱和的前提和有益的呈现外，结石的构成还有很多步调，分歧的抗尿石动物正在尿石症的分歧阶段阐扬感化。出格是，很多动物提取物通过防止氧化应激的发生而具有较着的抗锂活性 [ 51 – 53]。一种注释取 COM 乳头状结石的构成相关，占泌尿系结石的 13%，而正在肾腔中构成的 COM 结石占肾结石的 16%。COM 乳头状结石的成长取肾乳头的初始上皮下钙化相关，羟基磷灰石堆积取决于事后存正在的涉及活性氧和氧化应激的毁伤 [ 51 , 53 ]。酚类化合物，如黄酮类化合物、酚酸和单宁，被认为次要担任动物的抗氧化能力。
CaOx 正在存正在和不存正在C的环境下结晶。如“材料和方式”部门所述，还通过光学显微镜阐发了officinarum AE。正在对照系统中，培育 24 h 后获得的显微照片显示构成了两品种型的 CaOx 晶体：具有单斜棱柱形或孪晶形的大量 COM 晶体，只要少数具有典型双锥体外形的 COD 晶体（图 4A 和 4B）。COM 和 COD 晶体都很大，COM 呈现出大致斜方布局，具有高度多面的 {100} (图 4A) 和 {010} 人脸 (图 4B）。添加C。将厚朴提取物插手到反映夹杂物中会导致所发生晶体的布局、数量和大小发生变化。AE 浓度曾经达到 0.9–2 μg dw/ml (图 4C) 构成的粒子数量略多，此中大部门仍然是 COM。取对照组比拟，这些 COM 晶体更小，数量几乎减半；然而，{100} 和 {010} 双晶面因为宏不雅台阶的存正在而高度刻面，而且更小、更犯警则的外形表白正正在进行的发展动力学。跟着提取物浓度添加到 15-30 μg dw/ml (图 4D)，COM晶体数量更多，体积更小，更薄，外形更法则，滑腻的{100}面上有较着的凹陷，而COD晶体仍然很少见，中等大小。如图所示图 4E，正在 60–125 μg dw/ml COD 晶体存正在时，仍然是中等大小，变得更多，而 COM 晶体更多，更小，更薄，具有圆形边缘，有时呈哑铃形或新月形，可能是因为到滑腻的{100}面上的深深凹陷。正在高达 130–200 μg dw/ml (图 4F），晶体数量光鲜明显添加，几乎都是中小型COD晶体，只要偶尔的COM晶体。C浓度较高。officinarum AE 500 至 1000 μg dw/ml (图 4G 和 4H) 显示了 COD 形式的独一存正在。跟着提取物浓度的添加，构成的 COD 晶体的数量以剂量依赖性体例添加，同时察看到 COD 的大小逐步减小，最高浓度导致大量细小晶体的构成。
如“CaOx 结晶阐发”中所述制备并连结正在室温下的储蓄溶液用于表征正在存正在和不存正在C的环境下发生的 CaOx 晶体的结晶相。XRPD 的officinarum AE。为此，顺次放置：950 ml CaCl 2溶液、100 ml 蒸馏水或 EA 和 950 ml Na 2 C 2 O 4溶液，最终浓度别离为 5.0 mM 钙和 0.5 mM 草酸盐。用玻璃棒悄悄搅拌反映夹杂物并正在室温下放置150分钟。利用 0.45 μm 硝酸纤维素膜过滤器过滤夹杂物。获得的粉末正在室温下干燥并用于XRPD阐发。
然而，现实上了更多的晶体，并因其正在医治尿石症中的无益感化而被普遍研究 [ 56]，CaOx 结石患者口服柠檬酸钾导致尿液 COM 晶体概况呈现凹陷，我们正在C的感化中获得了额外的主要成果。并且跟着提取物剂量的添加，据报道，officinarum AE，一种家喻户晓的草酸钙结石构成剂，我们的微不雅阐发了C . 厚朴AE 改变 COM 晶体形态：正在 60-120 μg dw/ml 的范畴内。
图 6正在不存正在 (ad) 或存正在 (e, f) 分歧浓度C的环境下获得的各类形态类型 COM 和 COD 的扫描电子显微照片。厚朴AE。(a) 从 [ 1 ] 标的目的察看的孪晶 COM 晶体。(b) 单晶和双晶 COM 晶体。(c) 从 [ 10 ] 标的目的察看的双孪晶 COM 晶体。(d) 超孪晶和超孪晶 COM 晶体，构成花状堆积体。(e) 正在 500 μg dw/ml AE 存鄙人的单个四方双锥 COD 晶体；(f) 正在 1000 μg dw/ml AE 存鄙人，单方四方 COD 晶体和扁平 COD 晶体的小穿透孪晶。相反，正在C浓度添加的环境下，晶体形态发生了光鲜明显变化。药用AE (图 6E500微克干沉/毫升；图 6F1000 μg dw/ml AE）。析出的 COM 的总体积急剧削减曲至消逝，而 COD 晶体成为排他性的劣势。COD晶体的典型形式如图所示图 6E 和 6F. 它们具有 COD 的典范晶体习性，由以 {101} 面为从的单个四方双锥体为代表，沿晶体 c 轴的平均边长约为 6.5 μm，边长约为 1 μm（图 6E）。所有这些双锥体的特点是没有棱柱形 {100} 面，使晶体具有很是扁平的外形。正在更高放大倍数的 ESEM 图像中（图 6F)，局部穿透孪晶的构成正在较小的扁平四方双锥体中很较着。
C的总多酚含量。officinarum AE 是通过利用 Singleton 等人 (1999) [ 35 ] 稍做点窜 [ 36 ]描述的 Folin–Ciocalteu 方式分光光度法测定的]。提取物正在 80% 乙醇中恰当稀释；将越来越多的样品插手蒸馏水中，达到 100 μl 终体积，并取 50 μl Folin–Ciocalteu 试剂夹杂；利用了仅含水的试剂空白。正在室温下放置 3 分钟后，插手 300 μl 20% (w/v) 的碳酸钠，并用蒸馏水将体积调至 1 ml。利用的 AE 浓度范畴为 22–110 μg dw/ml。将试管涡旋夹杂 15 秒并正在室温下静置 30 分钟以显色，然后以 10,000 rpm 的转速离心 10 分钟。正在 725 nm (Uvikon 分光光度计) 丈量上清液吸光度。2 = 0.9973)。测定C中总黄酮浓度的方式。officinarum AE 是一种改良的氯化铝比色法 [ 37 ] 方案，颠末一些点窜并针对 96 孔微量滴定板中的丈量进行了调整。简而言之，将 25 μl 恰当稀释的 AE 添加到 5 μl 10% AlCl 3、5 μL 1M CH 3 COOK 和 215 μl 水中。正在 405 nm 处丈量夹杂物的吸光度。所有丈量一式三份进行。利用槲皮素浓度范畴为 0.1 至 0.5 mg/ml (R2 = 0.9964) 获得的尺度校准曲线，总黄酮类化合物暗示为每克 AE 干物质中槲皮素当量的毫克数 (QE)。